維生素 A（retinol）、維生素 D（vitamin D2 和 vitamin D3）、維生素E（tocopherol）是機體維持正常代謝和機能的所必需的脂溶性維生素。其中維生素 E 有 8 種異構體形式，即4 種生育酚（α、β、γ、δ-tocopherols）和 4 種三烯生育酚（α、β、γ、δ-tocotrienols），均具有重要的生物活性，被認為是一類主要的抗氧化劑。通常α-生育酚被報道是活性高的一種維生素E 形式，因此很多文獻報道的分析方法僅測定了α-生育酚的含量。近研究表明，其他幾種異構體形式也在人體中具有重要的作用，并且γ-生育酚具有抗癌作用。維生素E 異構體結構的復雜性和活性的差異，決定了建立一種準確可靠的分析方法，來分離和測定食品基質中各個異構體含量，具有重要意義。如何進行食品中維生素A、D、E的測定呢？
新版國標GB5009.82-2016對維生素E的四種異構體的分析提出了要求。而常規(guī)C18色譜柱很難將其實現基線分離。另外維生素 D 也是嬰幼兒配方食品中一種重要的營養(yǎng)素，在用常規(guī)反相C18分析D2 和D3 異構體的時候經常遇到分離度差的問題。
本文建立了同時測定食品中D和E含量的液相色譜法，可實現對維生素E的四種異構體和D2和D3兩種異構體的分析及準確定量。
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樣品前處理
取維生素 D2、D3 和E 標準品適量，精密稱定，至25 mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成濃度分別為 1.0 mg/mL 維生素 D3 和 D2 溶液和 2.06 mg/mL 維生素 E 儲備溶液。
分別精密量取維生素 D3 和 E 的標準品溶液適量，至 10 mL 棕色量瓶中，配制成混合溶液，再分別精密加入等量的濃度為 10 μg/mL 的維生素 D2 的內標溶液，甲醇稀釋至刻度，分別得到濃度為：ɑ-VE：2.4μg/ml，ß-VE：2μg/ml,γ-VE:1.6μg/ml、δ-VE:2.4μg/ml, D3: 0.08μg/ml.
儀器方法
四種維生素E異構體分析的色譜條件：
方法一
色譜柱：Acclaim C30
4.6×250 mm,5 μm(貨號：075718)
流動相：甲醇-水
流速：0.8mL/min
檢測器：紫外，296nm
柱溫：20℃
進樣量：10μL
儀器：Ultimate 3000
圖1 四種維生素E的實驗圖譜:Acclaim C30
方法二
色譜柱：Accucore PFP
3.0×150 mm,2.6 μm(貨號：17426-153030)
或 GOLD PFP 4.6×250 mm,5 μm(貨號：25405-254630)
流動相：甲醇-水
流速：0.6mL/min （Accucore PFP）, 1ml/min（GOLD PFP）
檢測器：紫外，296nm
柱溫：20℃
進樣量：10μL
儀器：Ultimate 3000
圖2 四種維生素E的實驗圖譜：Accucore PFP
圖3 四種維生素E的實驗譜圖：GOLD PFP
兩種維生素D異構體分析的色譜條件：
4.6×150 mm,3 μm(貨號：31103-154630)
流動相：乙腈：甲醇=60:40
流速：1mL/min
檢測器：紫外，264nm
柱溫：35℃
進樣量：10μL
儀器：Ultimate 3000
圖4 兩種維生素D異構體的實驗圖譜
結論
采用賽默飛公司Acclaim C30，Accucore PFP，GOLD PFP及Hypersil Green PAH 色譜柱可按照國標GB 5009.82-2016條件對維生素ADE進行分析，并對各化合物有較好的保留和分離。
